显微镜相衬镜检法术

一．相衬镜检法（Phasecontrast）

在光学显微镜的发展过程中，相衬镜检术的发明成功，是近代显微镜技术中的重要成就。我们知道，人眼只能区分光波的波长（颜色）和振幅（亮度），对于无色通明的生物标本，当光线通过时，波长和振幅变化不大，在明场观察时很难观察到标本。相衬显微镜利用被检物体的光程之差进行镜检，也就是有效地利用光的干涉现像，将人眼不可分辨的相位差变为可分辨的振幅差，即使是无色透明的物质也可成为清晰可见。这大大便利了活体细胞的观察，因此相衬镜检法广泛应用于倒置显微镜。

1.  相衬镜检法在装置上与明场不同，有一些特殊要求：

( 1 ) 环状光阑（Ringslit）：装在聚光镜的下方，而与聚光镜组合为一体——相衬聚光镜。它是由大小不同的环形光阑装在一圆盘内，外面标有10X、20X、40X、100X等字样，与相对应倍数的物镜配合使用。

( 2 ) 相板（Phase plate）：装在物镜的后焦平面处，它分为两部分，一是通过直射光的部分，为半透明的环状，叫共轭面；另一是通过衍射光的部分，叫“补偿面”。有相板的物镜称“相衬物镜”，外壳上常有“Ph”字样。

2. 相衬镜检法是一种比较复杂的镜检方法，想要得到好的观察效果，显微镜的调试非常重要。除此之外还应注意以下几个方面。

 ( 1 )光源要强，全部开启孔径光阑；

 ( 2 ) 使用滤色片，使光波近于单色；

二．微分干涉相衬镜检术（Differential interferencecontrast DIC）

微分干涉相衬镜检术出现于60年代，它不仅能观察无色透明的物体，而且图像呈现出浮雕壮的立体感，并具有相衬镜检术所不能达到的某些优点，观察效果更为逼真。

1．原理

微分干涉相衬镜检术是利用特制的渥拉斯顿棱镜来分解光束。分裂出来的光束的振动方向相互垂直且强度相等，光束分别在距离很近的两点上通过被检物体，在相位上略有差别。由于两光束的裂距极小，而不出现重影现像，使图像呈现出立体的三维感觉。

2．微分干涉相衬镜检术所需的特殊部件：

（1）起偏镜

（2）检偏镜

（3）渥拉斯顿棱镜2 块

3．微分干涉镜检时的注意事项

（1）因微分干涉相衬灵敏度高，制片表面不能有污物和灰尘。

（2）具有双折射性的物质，不能达到微分干涉相衬镜检的效果。

（3）倒置显微镜应用微分干涉相衬时，不能用塑料培养皿。